Estudio comparativo de las 2 β-fructofuranosidasas recombinantes de Bifidobacterium adolescentis ATCC 15703.

Abstract

Objetivo: Caracterizar las propiedades bioquímicas de las 2 β-fructofuranosidasas de la cepa Bifidobacterium adolescentis ATCC 15703. Materiales y métodos: A partir de los plásmido pET22-B.ad1(637) y pET22-B.ad2(518) clonados en la cepa Escherichia coli Rosetta™ 2, se produjeron las β-fructofuranosidasas 1 (GeneBank: BAF40106.1) y 2 (GenBank: BAF39931.1) de B. adolescentis ATCC 15703 en su forma recombinante y se determinaron sus propiedades bioquímicas como pH y temperaturas óptimos, actividad sobre diferentes sustratos y estabilidad térmica. La actividad enzimática fue determinada sobre Raftilosa Sinergy 1 al 1% en amortiguador de fosfatos 100 mM pH 6.0 y 5.5 a 50 °C para B.ad1(637) y Bad2(518), respectivamente. Resultados: El peso molecular calculado para B.ad1(637) fue de 62.5 kDa y para B.ad2 (518) fue de 55 kDa. La temperatura óptima fue de 50 ºC para B.ad1(637), y un rango de 50 a 55 °C para B.ad2(518). B.ad1(637) exhibió un rango de pH óptimo de 5.5 a 7.0, mientras que B.ad2(518) tuvo un pH óptimo de 5.5. La actividad relativa sobre los sustratos, Oligofructosa p95, Raftilosa Sinergy 1, Agavina, Sacarosa, Levana SacB 8.3, Raftilina HP, Inulina de L. Citreum, Levana B512 para B.ad1(637) fue de 45.0 %, 100 %, 61.7 %, 38.1 %, 33.8 % 29.2 %, 0.61 %, 0.61 %, mientras que para B.ad2(518) fue de 100 %, 45.9 %, 20.69 %, 5.7 %, 2.2 %, 1.7 % 0.11 % y XX%, respectivamente. Conclusiones: La mayor actividad enzimática a las condiciones ensayadas fue sobre Raftilosa Sinergy1 para B.ad1(637) y Oligofructosa p95 para B.ad2(518). Por lo tanto, estas enzimas se clasifican como β-fructofuranosidasas.